L'Underground Theme accompagne Mario dès qu'il s'aventure dans les niveaux souterrains de Super Mario Bros., à commencer par le mythique World 1-2. Ce thème apparaît dans tous les niveaux "underground" du jeu, ainsi que dans les salles de bonus accessibles via les tuyaux. L'atmosphère particulière de ces zones labyrinthiques, avec leurs briques destructibles et leurs passages secrets menant aux Warp Zones, est indissociable de cette mélodie mystérieuse qui contraste radicalement avec l'énergie du Ground Theme.

Koji Kondo a composé ce thème en se concentrant sur l'espace entre les notes pour créer une sensation d'être sous terre. Il a déclaré que son objectif était de capturer une "atmosphère inquiétante" avec un minimum de notes. Shigeru Miyamoto a même estimé que cette musique était "encore plus parfaite" que le Ground Theme pour son contexte. La ligne de basse funky du morceau présente une similarité frappante avec "Let's Not Talk About It" de Lee Ritenour, extrait de son album Friendship (1979), une pièce de jazz fusion que Kondo aurait pu écouter à l'époque.

Musicalement, l'Underground Theme se distingue par sa signature rythmique inhabituelle en 3/4 (avec des passages en 4/4), son tempo rapide de 200 BPM, et sa tonalité en do dorien qui lui confère ce caractère sombre et mystérieux. La boucle originale ne dure qu'environ 11 secondes, mais son impact culturel est immense. Ce thème est devenu l'un des plus iconiques de la franchise Mario et a été arrangé dans des dizaines de jeux, de Super Mario Bros. 3 (1988) qui a ajouté des percussions, jusqu'à Super Mario Bros. Wonder (2023) qui en incorpore le motif dans ses thèmes souterrains.