Assassin's Creed II est un jeu d'action-aventure en monde ouvert développé par Ubisoft Montréal et édité par Ubisoft qui sort le 19 novembre 2009 sur PS3 et Xbox 360, puis le 4 mars 2010 sur PC. Suite directe du premier opus, ce titre marque l'introduction d'Ezio Auditore da Firenze, nouveau protagoniste emblématique de la franchise, et transporte les joueurs dans l'Italie de la Renaissance.

L'histoire débute juste après les événements du premier jeu. Desmond Miles s'échappe d'Abstergo avec l'aide de Lucy Stillman et rejoint une planque d'Assassins modernes. Il utilise un nouvel Animus pour revivre les souvenirs d'Ezio, jeune noble florentin dont la famille est trahie en 1476. Son père et ses frères sont exécutés suite à un complot orchestré par des familles rivales liées aux Templiers. Ezio entame alors une quête de vengeance qui s'étend sur plus de 20 ans à travers Florence, Venise, la Toscane et Rome.

Le gameplay introduit de nombreuses nouveautés par rapport au premier opus : système économique pour acheter armes et armures, natation, double lame secrète, et collaboration avec des figures historiques comme Léonard de Vinci qui conçoit des gadgets pour l'Assassin. Les missions sont plus variées et le monde ouvert plus dense. Les DLC La Bataille de Forlì et Le Bûcher des Vanités ajoutent du contenu. Ce titre forme avec Brotherhood et Revelations la trilogie d'Ezio, compilée dans The Ezio Collection sortie en novembre 2016 sur PS4 et Xbox One.