Née le 20 juin 1980, Rebecca Chambers est une enfant prodige qui entre à l'université très jeune et obtient sa licence en chimie à 18 ans. Repérée pour ses talents exceptionnels, elle est recrutée par les S.T.A.R.S. de Raccoon City et intègre l'équipe Bravo comme médic de terrain et responsable de la sécurité arrière, devenant la plus jeune membre de l'unité. Le 23 juillet 1998, lors de sa toute première mission d'investigation sur des meurtres cannibales dans les montagnes Arklay, son hélicoptère tombe en panne. Séparée de son équipe, elle découvre l'Ecliptic Express, le train privé d'Umbrella, infesté de zombies. Elle s'allie avec le fugitif Billy Coen et ensemble ils affrontent les créations du Dr. James Marcus, fondateur d'Umbrella ressuscité par ses sangsues génétiquement modifiées.
Après avoir vaincu la Reine Sangsue et détruit le centre de recherche Umbrella, Rebecca se sépare de Billy en déclarant officiellement sa mort pour le protéger. Elle rejoint ensuite le manoir Spencer où elle retrouve Chris Redfield de l'équipe Alpha. Elle l'assiste dans l'exploration du manoir, préparant des sérums, mélangeant des produits chimiques et soignant les blessés. Ensemble, ils découvrent la trahison d'Albert Wesker et affrontent le Tyrant T-002. Rebecca survit à l'explosion du manoir avec Chris, Jill Valentine et Barry Burton, étant la seule survivante de l'équipe Bravo dans le canon officiel.
Après l'incident du manoir, Rebecca quitte le service de police et se tourne vers la recherche en biotechnologie. Elle devient professeure et chercheuse en virologie, puis conseillère du BSAA. En 2017, alors qu'elle travaille à l'Institut Alexander de Biotechnologie à Chicago sur un vaccin contre le A-Virus, son laboratoire est attaqué par le bioterroriste Glenn Arias. Chris Redfield la sauve et, avec Leon S. Kennedy, ils neutralisent Arias à New York dans Resident Evil Vendetta. En 2023, elle participe à l'enquête sur les meurtres liés au T-Virus à San Francisco aux côtés de Chris, Jill, Claire et Leon dans Resident Evil Death Island, travaillant sur un vaccin contre la nouvelle souche depuis sa base arrière.
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